LATEXOVÝ TEST - 

Bacillus cereus RPLA toxiny detekující kit (BCET-RPLA TD950)

     Tento kit se používá při detekci proteinových složek průjmového enterotoxinu Bacillus cereus, v různých potravinách a filtrátech kultur. Stanovení probíhá pasivním reversním latexovým srážením.

VÝHODY:

· Přímá detekce ze vzorků potravin do 24 hodin. Vhodnost také pro testování filtrátů kultur.

                        · Použití testu je snadné, test je snadno interpretovatelný a poskytuje jasnou reakci se zřejmým výsledkem.

· Citlivost 2 ng/ml ve filtrátech kultur.

Test se provádí na mikrotitračních destičkách, které mají prohlubně ve tvaru V. Na latexové částice je navázáno purifikované antisérum získané z králíků imunizovaných průjmovým enterotoxinem B. cereus. V přítomnosti tohoto enterotoxinu se částice latexu aglutinují a vytváří jasně patrnou latexovou strukturu.

Jestliže B. cereus enterotoxin není přítomen nebo se nachází v koncentraci nižší než je detekční limit testu, mřížová struktura se nevytvoří a latexové částice se usadí na úzkém dně V-prohlubně destičky.

SHRNUTÍ PRACOVNÍHO POSTUPU

EXTRAKCE TOXINU Z POTRAVINY

      Extrakce je hotová po smísení 10 g vzorku s 10 ml 0,9% chloridu sodného a 30 minut trvajícím odstředění při 4°C. Výsledný supernatant se poté zfiltruje a filtrát se použije na stanovení přítomnosti toxinu.

    Tento postup můžeme přizpůsobit charakteru potraviny. Abychom získali representativní vzorek ze stanovované dávky potraviny, musí být vybraná série desetigramových dílů získána z odlišných lokalit této dávky.

 PRODUKCE ENTEROTOXINŮ Z TEKUTÝCH VZORKŮ KULTUR

    B. cereus může být získán z potraviny nebo vzorků fekálií a identifikován užitím standardních metod. Užití Bacillus cereus selektivního agaru (Oxoid CM617 a SR99) napomůže isolaci a také odhadu, zda přítomným mikroorganismem může být B. cereus, ještě před detekcí toxinu.

    Isoláty by měly být zaočkovány na Brain-heart infusní pepton (CM225) a inkubovány při 32ºC po 6 - 18 hodin. Jakmile dojde k nárůstu, testovaný vzorek můžeme extrahovat centrifugací nebo filtrací.

 ROZBOR METODY (POSTUP PŘI METODĚ)

     1.      Protřepeme důkladně činidla

2.      Umístíme V-prohlubně mikrotitračních destiček tak, že každá řada sestává z osmi prohlubní. (Na každý vzorek je potřeba dvou takových řad.)

3.      Dáme 25 μl ředícího roztoku do každé prohlubně vyjma prvních u obou řad.

4.      Přidáme 25 μl testovaného vzorku do první a druhé prohlubně obou řad.

5.      Odebereme 25 μl ze druhé prohlubně a postupně v řadě zdvojnásobujeme ředění, konče sedmou prohlubní. Poslední (osmá) bude obsahovat pouze ředící roztok.

6.      Přidáme 25 μl latexu pokrytého králičím antisérem (TD951) do každé prohlubně v první řadě.

7.      Do řady 2 přidáme po 25 μl kontrolního latexu (TD952).

8.      Protřepeme destičky (ručně nebo mikromixerem), abychom promíchali obsah každé prohlubně.

9.      Zakryjeme destičky a necháme nerušeně po 20 - 24 hodin.

10.  Zkontrolujeme každou prohlubeň proti černému pozadí, zda zde neproběhla aglutinace. Destičky očistíme roztokem chlornanu ( > 1,3% v/v).

INTERPRETACE TESTU

Výsledek testu, míru aglutinace, odhadneme srovnáním s níže uvedenou ilustrací.